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液相色譜方法開發(fā)中紫外吸收波長的選擇

2023-01-10

液相色譜方法開發(fā)過程中,樣品的紫外吸收波長對開發(fā)結果具有舉足輕重的影響。對于許多樣品而言,只有仔細選擇合適的檢測波長,才能得到良好的分離效果。選擇波長時需了解各樣品組分的UV光譜,若能取得被測物的標準品,可較快獲得各樣品組分的UV圖譜,應用DAD還可獲得大量的其他補充信息。

選擇吸收波長一般包含(不限于)

以下幾種考慮

1、不光考慮目標物的更大吸收波長,同時要考慮樣品干擾物吸收值更小的波長。

2、飽和烴類以及其氨基或氰基衍生物是僅有的一類完全不適合UV檢測的有機化合物。

3、被特定基團(-O-、-OH、-Cl、-COOH、-COOR)取代的飽和烴類具有臨界吸收值,可能需在短波長處(185-210nm)檢測。

4、除上述幾類化合物外,一般化合物都能在較長波長(>210nm)檢測。下表列出各種官能團的更大波長與摩爾吸收系數(shù)。

一些常用官能團的更大吸收波長與摩爾吸收系數(shù)

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5、流動相組分的紫外本底吸收。此項考慮涉及到溶劑的種類選擇、流動相pH選擇以及流動相緩沖鹽選擇等。有些酸有紫外本底,如甲酸,乙酸;有些沒有,如磷酸。這樣,在使用較低波長檢測的方法時,就要考慮使用紫外本底小的酸。冰醋酸在短波長檢測下應該慎用。水在180nm以上實際無吸收,可忽略其影響。正相色譜所用溶劑的吸收度通常更強,所以一般需在長波長檢測。


6、更大吸收波長λmax與化學結構的關系。紫外光譜提供了分子中生色團和助色團的信息,目前雖不能精確計算紫外特征吸收峰,但已總結出各種經驗規(guī)則。更早提出的Woodward(伍德沃德)和Fieser(費塞爾)規(guī)則可用來估算二烯烴,多烯烴及共軛烯酮類化合物的更大紫外吸收波長。

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參考資料:

1. 實用高效液相色譜法的建立[美]L.R.森德爾 J.J.柯克蘭 J.L.格萊吉克 著.張玉奎 王杰 張維冰 譯.

2. 基礎有機化學(第三版).刑其毅 裴偉偉 徐瑞秋 裴堅.

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