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溶劑系統(tǒng)對RP-HPLC分離性能的影響

2022-06-27

反相高效液相色譜(RP-HPLC)是液相色譜中更常用的模式,廣泛應(yīng)用于化工制藥生物工程等領(lǐng)域。RP-HPLC中溶劑系統(tǒng)的選擇和優(yōu)化一直是液相色譜領(lǐng)域的熱門研究課題,對于多組分目標(biāo)物的分析與分離,有效選擇并優(yōu)化色譜溶劑系統(tǒng)仍存在很多問題,本研究考察了溶劑系統(tǒng)的強(qiáng)度,極性等參數(shù)對RP-HPLC分離性能的影響。

示例

色譜柱:UItimate? ODS-3 4.6mm×150mm,5μm;

柱溫:25℃;

檢測器:UV225nm;

流速:1.0mL/min;

進(jìn)樣量:10μL。

流動相A :0.1%磷酸 B:ACN,A:B=3:7,

色譜柱:Xtimate? 4.6mm×150mm,5μm。

微信截圖_20220627100948.png

流動相A :0.1%磷酸 B:ACN,A:B=3:7,

色譜柱 :UItimate? ODS-3 4.6mm×150mm,5μm。

微信截圖_20220627101027.png

由圖譜判斷8.6min峰內(nèi)夾雜小峰未分開,UItimate? ODS-3 4.6mm×150mm,5μm更適合分離。

考慮不同溶劑洗脫強(qiáng)度不同,有機(jī)相中加入甲醇,流動相A :0.1%磷酸 B:ACN:甲醇=82,A:B=3:7。

微信截圖_20220627101102.png

從圖譜中可以看出加入甲醇后峰明顯分離。

調(diào)整有機(jī)溶劑比例,流動相A :0.1%磷酸 B:ACN:甲醇=7:3,A:B=3:7。

微信截圖_20220627101134.png

調(diào)整有機(jī)溶劑比例后可以得出10.7min和11.9min分離度增加到3.0。

優(yōu)化方法,流動相A :0.1%磷酸 B:ACN:甲醇=7:3,A:B=4:6。

微信截圖_20220627101155.png

從圖譜中可以看出將峰分開,分離度增大,適當(dāng)?shù)恼{(diào)整有機(jī)相種類及比例可以提高分離性能。

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