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HPLC蒸發(fā)光散射檢測器

2022-06-23

HPLC蒸發(fā)光散射檢測器

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蒸發(fā)光散射檢測器屬于通用型檢測器,能夠分析任何揮發(fā)性低于流動(dòng)相的化合物。其原理是:首先將柱洗脫液霧化形成氣溶膠,然后在加熱的漂移管中將溶劑蒸發(fā),更后余下的不揮發(fā)性溶質(zhì)顆粒在光散射檢測池中得到檢測。

示差檢測受溶劑前沿峰的干擾使得分析復(fù)雜化,并且由于對溫度極其敏感使得基線很不穩(wěn)定,與梯度洗脫不相容。另外,示差檢測器的響應(yīng)不如ELSD靈敏;低波長紫外檢測器在急變梯度條件下受基線漂移的困擾,并要求被分析化合物帶有發(fā)色團(tuán),ELSD則不受這些限制。不同于這些檢測器的是,ELSD能在多溶劑梯度的情況下獲得穩(wěn)定的基線,使得分辨率更好、分離速度更快。此外,因?yàn)镋LSD的響應(yīng)不依賴于樣品的光學(xué)特性,所以ELSD檢測時(shí)樣品不要求帶有發(fā)色團(tuán)或熒光基團(tuán)。

經(jīng)HPLC分離的柱洗脫液進(jìn)入霧化器,在此與穩(wěn)定的霧化氣體(一般為氮?dú)?混合形成氣溶膠。氣溶膠由均勻分布的液滴組成,液滴大小取決于分析中采用的氣體流量。氣體流量越低形成的液滴越大,液滴越大則散射的光越多,從而提高了分析靈敏度,但是越大的液滴在漂移管中越難蒸發(fā)。每種方法均存在產(chǎn)生更佳信號(hào)噪音比率的更優(yōu)化氣體流量。流動(dòng)相流速越低要求適當(dāng)霧化的氣體流量也越低。用內(nèi)徑為2.1mm的微徑柱代替內(nèi)徑為4.6mm標(biāo)準(zhǔn)型分析柱,能大大降低流動(dòng)相流速,因而提高分析的靈敏度。

蒸發(fā)氣溶膠中揮發(fā)性成分在加熱的不銹鋼漂移管中蒸發(fā)。為特定應(yīng)用設(shè)置適當(dāng)?shù)钠乒軠囟?,取決于流動(dòng)相組成和流速,以及樣品的揮發(fā)性。高有機(jī)含量流動(dòng)相比高含水量流動(dòng)相要求蒸發(fā)的漂移管溫度低。流動(dòng)相流速越低要求蒸發(fā)的漂移管溫度越低。半揮發(fā)性樣品要求采用較低的漂移管溫度,以獲得更佳靈敏度。更佳溫度需要通過觀察各溫度時(shí)的信號(hào)噪音比率來確定。

檢測:懸浮于流動(dòng)相蒸汽中的樣品顆粒從漂移管進(jìn)入到光散射檢測池。在檢測池中,樣品顆粒散射激光光源發(fā)出的光而蒸發(fā)的流動(dòng)相不散射。散射光被硅光電二極管檢測,產(chǎn)生電信號(hào)輸送模擬信號(hào)輸出端口,被用于模擬輸出的數(shù)據(jù)采集。

ELSD的應(yīng)用優(yōu)勢

1. 蒸發(fā)光散射的響應(yīng)值與被測物質(zhì)的官能團(tuán)和光學(xué)性質(zhì)無關(guān),故可用于對各種物質(zhì)的檢測。對無特征紫外吸收或只有紫外末端吸收的大分子有機(jī)化合物的檢測,顯示出極大的優(yōu)越性。

2. 簡化了樣品的預(yù)處理過程,縮短了分析時(shí)間。

3. 基線穩(wěn)定,樣品檢測靈敏度高。流動(dòng)相的蒸發(fā)使得ELSD和梯度洗脫相容,可以提高色譜分離的分辨率并縮短分析時(shí)間。

4. 只需一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品就可定量兩個(gè)或更多的未知品,因此可以通過和內(nèi)標(biāo)比較來定量未知化合物。此特性對于組合化學(xué)中用組合技術(shù)合成的化合物的定量尤其有用。

5. 所選的未知物結(jié)構(gòu)相似而分子量不同,定量準(zhǔn)確性更高。

6. UVD定量未知化合物是很困難的,樣品的紫外吸收值往往和代表樣品質(zhì)量的色譜峰大小無關(guān),而對于ELSD來說,其響應(yīng)不依賴于樣品的光學(xué)特性,代表了樣品的組成,檢測信號(hào)更為直接的代表樣品的真實(shí)濃度,與樣品的質(zhì)量濃度呈正比,因而能用于測定樣品的純度或檢測未知物。

注意事項(xiàng)及補(bǔ)充

1、洗脫液需要霧化,所以霧化氣流的純度和壓力會(huì)影響檢測器的信噪比?! ?/p>

2、流動(dòng)相要蒸發(fā)掉,所以不能使用不易揮發(fā)的物質(zhì)來調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值??梢酝ㄟ^蒸發(fā)溫度的調(diào)節(jié)來使比被測物質(zhì)沸點(diǎn)低的組分蒸發(fā)。在不使被測物質(zhì)蒸發(fā)的前提下,溫度越高,流動(dòng)相蒸發(fā)越完全,色譜圖基線越好、信號(hào)比就越高。濃度跟峰面積不成線性,分別取自然對數(shù)后成線性。


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