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反相離子對色譜法建立的注意事項(xiàng)(二)

2022-06-23

今天小編再給大家分享一些注意事項(xiàng):


方法調(diào)整

有機(jī)相,pH值,進(jìn)樣量,柱溫等。


有機(jī)相

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案例

色譜條件

色譜柱:月旭UltimateXB C18(4.6×250,5μm)。

流動相:A相:磷酸鹽緩沖液(磷酸二氫鉀6.8g/L,磷酸調(diào)整pH=2.5);  

B相:甲醇/乙腈/四氫呋喃;

檢測器:280nm;

柱溫:30℃;

流速:1.0ml/min;

進(jìn)樣量:10μL;

樣品溶劑:A相;

樣品溶液:L-去甲腎上腺素、腎上腺素、L-酪氨酸、多巴胺用溶劑配置成濃度均為:0.2mg/mL。


B相:6%乙腈

微信截圖_20220623100955.png

B相:10%甲醇

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B相:2.5%四氫呋喃

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討論:在使用相似洗脫能力的有機(jī)相比例的情況下,同時(shí)檢測L-去甲腎上腺素、腎上腺素、L-酪氨酸、多巴胺4種物質(zhì),常用的甲醇,乙腈,四氫呋喃三種有機(jī)溶劑具有不同的分離結(jié)果,可以根據(jù)表《溶劑的選擇性特征》進(jìn)行篩選。

pH值

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討論:針對于易解離的物質(zhì),不同的pH會導(dǎo)致物質(zhì)的解離程度不一樣,進(jìn)而引起保留時(shí)間的差異,反相離子對色譜法中需要物質(zhì)成為統(tǒng)一的解離狀態(tài)。

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