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葡聚糖凝膠LH-20,天然產(chǎn)物精細(xì)純化的得力助手

2020-08-10

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圖|蛋白純化填料

天然產(chǎn)物是指從動物、植物及微生物中分離出來的生物二次代謝產(chǎn)物,自從發(fā)現(xiàn)來自天然界的有機化合物具有特殊的生理活性后,已經(jīng)開發(fā)出許多具有治療和保健作用的藥物。

由于天然產(chǎn)物往往含有結(jié)構(gòu)、性質(zhì)不同的多種成分,且有效成分的含量一般較低。為了研究和開發(fā)天然產(chǎn)物,就要選擇合適的層析填料,從復(fù)雜的中草藥組成成分中提取、分離出有活性的單體純成分。

 產(chǎn)品介紹

葡聚糖凝膠LH-20通過葡聚糖凝膠 G-25的羥丙基化制備,并且專門適合用于有機溶劑分離嗜脂性分子,天然產(chǎn)物在有機溶劑中的純化,例如類固醇,萜類化合物,脂質(zhì)和低分子量肽。

 產(chǎn)品參數(shù)

產(chǎn)品

Tandex  LH-20

干粉粒徑

30-120μm

排阻限(球蛋白)

<5kDa

pH穩(wěn)定性

2-13(短時間,在位清洗)

更大流速

700cm/h

操作壓力

≤0.3MPa

貯存溫度

避光,干燥,4-30℃

葡聚糖凝膠 LH-20 的使用方法

將干粉浸泡于 60-70%乙醇中(充分?jǐn)嚢瑁慈タ赡艽嬖诘臍埩粑铮楦扇缓鬂駪B(tài)不間隙裝柱,jue對不能出現(xiàn)凝膠斷層(否則要重新裝柱),動態(tài)用一倍柱體積的 60-70%乙醇淋洗,再用水洗凈乙醇即根據(jù)自己選用洗脫液平衡層析柱至少兩個柱體積直到基線變得平穩(wěn)為止,如改變?nèi)軇?yīng)該注意凝膠在新溶劑中的溶脹性質(zhì),并根據(jù)性質(zhì)確定柱高。如使用相同的溶劑,在以后的層析中柱平衡可以省略。

葡聚糖凝膠 LH-20 洗脫溶劑

葡聚糖凝膠 LH-20 洗脫溶劑分為兩類:反相和正相兩種。用得更多的是反相溶劑洗脫,以甲醇——水系統(tǒng)更為常見,先用水,逐漸增加甲醇比例,更后用 100%甲醇沖柱。正相系統(tǒng)以氯仿——甲醇更為常見,先用 50%氯仿——甲醇,逐漸增加甲醇比例,更后用 100%甲醇沖柱。

樣品的處理和洗脫溶劑的選擇

如果樣品極性大,選用反相溶劑洗脫(甲醇——水),樣品用更少體積的甲醇——水(盡可能甲醇少一些)溶解,過濾后,濕法上樣(必須要進(jìn)行過濾!否則把葡聚糖凝膠 LH-20 堵塞,就必須將葡聚糖凝膠 LH-20 的柱頭部分棄去, 造成不必要的浪費) 。如果樣品極性小, 這選用正相溶劑洗脫 (氯仿——甲醇) ,樣品用更少體積的氯仿——甲醇溶解,過濾后,濕法上樣。

葡聚糖凝膠LH-20的分離技巧

(1)流速要控制好,流速不可太快,為了快加壓,分子篩效果會降低:過慢會導(dǎo)致樣品在柱子擴(kuò)散嚴(yán)重,達(dá)不到分離效果。

(2)柱子盡可能長,Tandex LH-20 柱長的增加將極大地改善分離,所不要吝惜填料,寧可將填料全裝在一根大柱子中,不要將填料裝成幾根小柱。所謂集中優(yōu)勢兵力,打擊敵人。

(3)餾分一定要接的細(xì),可1/10,或1/20 個保留體積接成一餾分。

(4) 洗脫體積一般為2-3個保留體積,對特殊保留強的化合物,可洗脫5個保留體積。

(5)如果黃酮類化合物粗提物中有鞣質(zhì),那么你就要小心了,Tandex?LH-20對鞣質(zhì)幾乎是死吸附的。如果不考慮填料,可用Tandex LH-20分鞣質(zhì)。

(6)填料反復(fù)使用,每次用完,一般可用甲醇將柱子洗干凈,然后用下一次分離的起步溶劑將甲醇替換出來。

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