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葡聚糖凝膠LH-20，天然產(chǎn)物精細(xì)純化的得力助手

2020-08-10

圖｜蛋白純化填料

天然產(chǎn)物是指從動物、植物及微生物中分離出來的生物二次代謝產(chǎn)物，自從發(fā)現(xiàn)來自天然界的有機化合物具有特殊的生理活性后，已經(jīng)開發(fā)出許多具有治療和保健作用的藥物。

由于天然產(chǎn)物往往含有結(jié)構(gòu)、性質(zhì)不同的多種成分，且有效成分的含量一般較低。為了研究和開發(fā)天然產(chǎn)物，就要選擇合適的層析填料，從復(fù)雜的中草藥組成成分中提取、分離出有活性的單體純成分。

產(chǎn)品介紹

葡聚糖凝膠LH-20通過葡聚糖凝膠 G-25的羥丙基化制備，并且專門適合用于有機溶劑分離嗜脂性分子，天然產(chǎn)物在有機溶劑中的純化，例如類固醇，萜類化合物，脂質(zhì)和低分子量肽。

產(chǎn)品參數(shù)

產(chǎn)品	Tandex LH-20
干粉粒徑	30-120μm
排阻限（球蛋白）	＜5kDa
pH穩(wěn)定性	2-13（短時間，在位清洗）
更大流速	700cm/h
操作壓力	≤0.3MPa
貯存溫度	避光，干燥，4-30℃

葡聚糖凝膠 LH-20 的使用方法

將干粉浸泡于 60-70％乙醇中（充分?jǐn)嚢瑁慈タ赡艽嬖诘臍埩粑铮楦扇缓鬂駪B(tài)不間隙裝柱，jue對不能出現(xiàn)凝膠斷層（否則要重新裝柱），動態(tài)用一倍柱體積的 60-70％乙醇淋洗，再用水洗凈乙醇即根據(jù)自己選用洗脫液平衡層析柱至少兩個柱體積直到基線變得平穩(wěn)為止，如改變?nèi)軇?yīng)該注意凝膠在新溶劑中的溶脹性質(zhì)，并根據(jù)性質(zhì)確定柱高。如使用相同的溶劑，在以后的層析中柱平衡可以省略。

葡聚糖凝膠 LH-20 洗脫溶劑

葡聚糖凝膠 LH-20 洗脫溶劑分為兩類：反相和正相兩種。用得更多的是反相溶劑洗脫，以甲醇——水系統(tǒng)更為常見，先用水，逐漸增加甲醇比例，更后用 100％甲醇沖柱。正相系統(tǒng)以氯仿——甲醇更為常見，先用 50％氯仿——甲醇，逐漸增加甲醇比例，更后用 100％甲醇沖柱。

樣品的處理和洗脫溶劑的選擇

如果樣品極性大，選用反相溶劑洗脫（甲醇——水），樣品用更少體積的甲醇——水（盡可能甲醇少一些）溶解，過濾后，濕法上樣（必須要進(jìn)行過濾！否則把葡聚糖凝膠 LH-20 堵塞，就必須將葡聚糖凝膠 LH-20 的柱頭部分棄去，造成不必要的浪費）。如果樣品極性小，這選用正相溶劑洗脫（氯仿——甲醇），樣品用更少體積的氯仿——甲醇溶解，過濾后，濕法上樣。

葡聚糖凝膠LH-20的分離技巧

（1）流速要控制好，流速不可太快，為了快加壓，分子篩效果會降低：過慢會導(dǎo)致樣品在柱子擴(kuò)散嚴(yán)重，達(dá)不到分離效果。

（2）柱子盡可能長，Tandex LH-20 柱長的增加將極大地改善分離，所不要吝惜填料，寧可將填料全裝在一根大柱子中，不要將填料裝成幾根小柱。所謂集中優(yōu)勢兵力，打擊敵人。

（3）餾分一定要接的細(xì)，可1／10，或1／20 個保留體積接成一餾分。

（4）洗脫體積一般為2-3個保留體積，對特殊保留強的化合物，可洗脫5個保留體積。

（5）如果黃酮類化合物粗提物中有鞣質(zhì)，那么你就要小心了，Tandex?LH-20對鞣質(zhì)幾乎是死吸附的。如果不考慮填料，可用Tandex LH-20分鞣質(zhì)。

（6）填料反復(fù)使用，每次用完，一般可用甲醇將柱子洗干凈，然后用下一次分離的起步溶劑將甲醇替換出來。